Spinosad’ın iki etki modu vardır: İlk etki modu, nikotinik asetilkolin reseptörlerinin uyarılmasını veya aktivasyonunu uzatan, sinaptik sonrası hücre bağlantılarında bulunan nikotinik asetilkolin reseptörlerinde asetilkolinin bağlanmasını bozmayı/engellemeyi içerir. Sonuç olarak, bu, böceğin merkezi sinir sisteminin uyarılması, felç ve nihayetinde ölümle sonuçlanır.
İkinci eylem modu, GABA kapılı iyon kanallarını olumsuz yönde etkilemekle bağlantılıdır. Spinosad’ın etki şekli, IRAC Grup 4’teki neonikotinoid insektisitlere (imidacloprid, dinotefuran, thiamethoxam ve acetamiprid) benzerdir, çünkü her iki grup da reseptör bölgelerinde benzer proteinleri hedef alır. Ancak spinosad bu proteinlerin farklı hedef bölgelerinde aktiftir. Ayrıca neonikotinoidler doğrudan reseptörlere bağlanırken, spinosad kısmen reseptöre bağlanır ve şeklini değiştirir.
Spinosad ayrıca GABA kapılı klorür kanalları üzerinde, ancak sinir sisteminde farklı bir hedef bölgede etki ederek Grup 6’ya (aşağıya bakınız) benzer bir etki moduna sahiptir. Sonuç olarak, spinosad ve abamektin, batı çiçek thripslerine ( Frankliniella occidentalis ) karşı rotasyon programlarında asla arka arkaya uygulanmamalıdır . Aslında, batı çiçek thrips popülasyonları, duyarlılığı azaltan hedef bölgenin (nikotinik asetilkolin reseptörü) modifikasyonuna dayalı olarak spinosad’a karşı direnç geliştirmiştir, ancak gelişmiş metabolik detoksifikasyon da söz konusu olabilir.